Giới thiệu về xét nghiệm bất hoạt HIV:

Cơ quan xét nghiệm bất hoạt HIV nào có dữ liệu chính xác hơn? Feifan Testing đã cam kết xây dựng một công ty kiểm tra bên thứ ba chuyên nghiệp tại Trung Quốc trong nhiều năm. Công ty cũng liên tục học hỏi và tính phí tương đối hợp lý cho các dự án kiểm tra, trở thành sự lựa chọn của hàng ngàn công ty. Đồng thời, Feifan Testing cũng đã hợp tác với nhiều viện nghiên cứu khoa học và đạt được kết quả tốt. Công ty cũng không ngừng cải tiến nhiều công nghệ phát hiện vi-rút, bao gồm công nghệ và thiết bị chuyên nghiệp để phát hiện bất hoạt vi-rút HIV.

Phương pháp xét nghiệm bất hoạt virus HIV bằng phương pháp treo quy trình vận hành xét nghiệm bất hoạt định lượng:

1) Lấy tế bào MT4 đông lạnh ra khỏi nitơ lỏng, rã đông nhanh trong nước ấm 37℃, rửa hai lần bằng dung dịch duy trì tế bào, sau đó chuyển vào bình nuôi cấy có chứa 10ml môi trường nuôi cấy hoàn chỉnh. Sự phát triển của tế bào được quan sát hàng ngày và các tế bào được thu hoạch trong giai đoạn tăng trưởng logarit để thử nghiệm khử trùng.

2) Lấy virus HIV-1 đông lạnh ra khỏi nitơ lỏng và cấy vào bình nuôi cấy chứa 10 ml dịch huyền phù tế bào (chứa 700.000 tế bào/ml~800.000 tế bào/ml). Quan sát các tổn thương hàng ngày và thu hoạch virus khi 3/4 số tế bào có biểu hiện tổn thương. Khi thu hoạch, môi trường nuôi cấy được loại bỏ và ly tâm càng nhanh càng tốt, và phần dịch trong chứa vi-rút được phân phối vào các ống ly tâm vô trùng (1,5 ml) với 0,5 ml cho mỗi ống và bảo quản đông lạnh ở -80°C để sử dụng sau. Nếu không thể ly tâm ngay lập tức, chai nuôi cấy có thể được đông lạnh tạm thời và bảo quản ở nhiệt độ -20℃, sau đó ly tâm và đóng gói càng sớm càng tốt.

3) Lấy chất khử trùng cần thử nghiệm và pha loãng theo từng đợt với nước khử ion vô trùng theo tỷ lệ 1:2, 1:4, 1:8... Xác định độ pha loãng cao nhất tùy thuộc vào loại chất khử trùng và mục đích của thí nghiệm. Để ngăn ngừa ô nhiễm môi trường nuôi cấy, chất khử trùng cần được lọc và khử trùng trước khi thử nghiệm nếu cần.

4) Lấy 50ul chất khử trùng cần thử nghiệm và trộn với 50ul dung dịch dự trữ virus. Sau một khoảng thời gian nhất định ở nhiệt độ quy định (thời gian và nhiệt độ được xác định theo yêu cầu thử nghiệm), 0,9 ml dung dịch huyền phù tế bào MT4 (400.000 tế bào/ml) được chuẩn bị bằng môi trường nuôi cấy hoàn chỉnh được thêm ngay lập tức và đặt ở 37°C trong 40 phút để đảm bảo rằng tất cả các loại vi-rút còn sót lại đều được hấp phụ trên tế bào. Trong thử nghiệm nhóm đối chứng dương tính (virus), nước khử ion vô trùng được sử dụng thay cho chất khử trùng; trong thử nghiệm độc tính tế bào của chất khử trùng, nước khử ion vô trùng được sử dụng thay cho virus.

5) Lấy ống phản ứng ra và loại bỏ ngay chất khử trùng còn sót lại. Việc điều trị có thể được thực hiện bằng cách loại bỏ vật lý hoặc trung hòa (phương pháp sử dụng phải được chứng minh bằng thực nghiệm là có hiệu quả trong việc loại bỏ chất khử trùng còn sót lại và không có tác dụng tiêu diệt hoặc ức chế tế bào và HIV.

6) Chuẩn độ lượng vi-rút còn lại trong mẫu trong đĩa nuôi cấy 96 giếng. Đầu tiên, thêm 100 μl dung dịch huyền phù tế bào MT4 (chứa 400.000 tế bào/ml) được chuẩn bị bằng môi trường nuôi cấy hoàn chỉnh vào mỗi giếng của đĩa nuôi cấy (96 giếng). Đồng thời, các mẫu chuẩn độ được pha loãng theo tỷ lệ 1:10 với môi trường nuôi cấy hoàn chỉnh, sau đó 100u1 mẫu đã pha loãng được thêm vào đĩa nuôi cấy 96 giếng chứa huyền phù tế bào MT4. Tạo 4 giếng cho mỗi độ pha loãng.

7) Đặt đĩa nuôi cấy 96 giếng có chứa chất lỏng theo quy trình trên vào tủ ấm carbon dioxide (37°C, 5% CO2) và quan sát các tổn thương tế bào dưới kính hiển vi hàng ngày. Các tế bào bị nhiễm trùng hợp lại và sưng lên, tạo thành các tế bào khổng lồ có nhiều nhân. Vào ngày thứ 4, 50 μl môi trường hoàn chỉnh mới được thêm vào mỗi giếng phản ứng. Vào ngày thứ 7, những thay đổi bệnh lý của tế bào được quan sát và ghi chép rõ ràng.

8) Thí nghiệm được lặp lại 3 lần.

Quy tắc đánh giá:

(1) Đối với HIV của nồng độ thử nghiệm, sau ba lần thử nghiệm bất hoạt, không còn phát hiện được nữa. Lúc này, giá trị logarit của bất hoạt phải ≥4,00, có thể đánh giá là nồng độ và thời gian tác dụng của chất khử trùng, và xét nghiệm trong phòng thí nghiệm về việc khử trùng các chất ô nhiễm HIV được đủ điều kiện.

(2) Trong điều kiện bình thường, giá trị logarit của nồng độ nhiễm virus (TCID.o) của nhóm chứng dương tính với HIV phải nằm trong khoảng từ 5 đến 7. Các tế bào chủ trong nhóm đối chứng âm tính phát triển tốt và không phát hiện thấy HIV. Chất khử trùng ở nồng độ sử dụng không gây ảnh hưởng xấu đến sự phát triển của tế bào vật chủ. Nếu không, tùy thuộc vào các vấn đề tìm thấy, hãy điều chỉnh nồng độ của hỗn dịch HIV, chọn nồng độ khử trùng thích hợp, thay thế thuốc thử và môi trường nuôi cấy bị nhiễm bẩn hoặc cải thiện các điều kiện liên quan khác và lặp lại thí nghiệm.

Ghi chú:

(1) Người vận hành phải có kinh nghiệm sâu rộng trong các thí nghiệm về virus học và phải tuân thủ nghiêm ngặt các quy định về an toàn của phòng thí nghiệm BSL3. Nếu bạn có sức khỏe kém hoặc bị thương, bạn nên tạm thời ngừng làm việc.

(2) Tất cả các hoạt động có thể gây nhiễm trùng phải được thực hiện trong phòng sạch áp suất âm dòng chảy tầng của phòng xét nghiệm BSL3.

(3) Nếu xảy ra tai nạn và có khả năng lây nhiễm vi-rút hoặc ô nhiễm môi trường, không được hoảng loạn. Ngoài việc tiến hành khử trùng đúng cách ngay lập tức, bạn nên báo cáo với phòng thí nghiệm và trưởng đơn vị càng sớm càng tốt.

(4) Chu kỳ thử nghiệm này tương đối dài và cần phải cẩn thận để tránh nhiễm bẩn mẫu trong suốt quá trình.

Quy trình báo cáo kiểm tra chất lượng thử nghiệm Feifan:

1. Cung cấp thông tin sản phẩm

2. Các kỹ sư đề xuất các hạng mục thử nghiệm phù hợp dựa trên thông tin sản phẩm của bạn và cung cấp cho bạn báo giá

3. Xác nhận không có vấn đề gì với báo giá, sau đó gửi mẫu đến phòng thí nghiệm của chúng tôi

4. Nộp lệ phí thi và sắp xếp ngày thi

5. Sau khi thử nghiệm hoàn tất, báo cáo thử nghiệm sẽ được phát hành và gửi đến khách hàng